Pewarnaan Hematoxylin

Sumber Gambar : leica-microsystems.com

Untuk mewarnai amoeba dan cyste dari feces dapat dilakukan dengan zat warna hematoxylin. Cara pewarnaan ada berbagai macam cara.

I.    Cara Hematoxylin DELAFELD.

Larutan-larutan yang diperlukan:

1.     Sublimat-alkohol.

Sublimat jenuh : 100 ml.

Alkohol absolut       : 50 ml.

2.     Jodium-alkohol.

Alkohol absolut       :105 ml.

Aquadest          : 45 ml.

Bubuhi dengan Jod. sampai warnanya merah.

3.     Natrium-hyposulfit 0,2%.

Natrium hyposulfit   : 0,2 gram.

Aquadest             : 100 ml.

4.     Larutan Hematoxylin Delafeld.

Hematoxylin kristal        : 1 gram.

Alkohol 96%                 : 6 ml.

Alum.ammonium-sulfat : 15 gram.

Air suling panas            : 100 ml.

Sesudah larut semuanya, saring dan biarkan da@#$% petri yang besar, terbuka selama 3 hari untuk mematangkan. Saring lagi dan kepada filtratnya ditambah dengan : glycerin 25 ml, metanol 25 ml. Bila perlu dapat disaring sekali lagi, dapat dipakai sesudah 10-15 hari.

Pemakaian :15 ml larutan hematoxylin Delafeld + 135 ml aquadest (jadi diencerkan 10 kali).

Cara pewarnaan :

~         Sedikit feces diapuskan pada objek gelas, keringkan dan fiksasi 3x di atas api Bunsen.

~         Celupkan ke dalam sublimat-alkohol                         : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran, Jod-alkohol                            : 10 menit.

~         Cuci dengan air, Natrium-hyposulfit                          : 5 menit.

~         Cuci dengan air, larutan DELAFELD                         : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran mengalir pelan-pelan                : 15 menit.

~         Celupkan ke dalam alkohol 70%                               : 1 menit.

~         Celupkan ke dalam alkohol 96%                               : 1 menit.

~         Celupkan ke dalam alkohol absolut                          : 1 menit.

~         Celupkan ke dalam minyak kayu putih atau xylol       : 1 menit.

~         Keringkan dengan kertas saring, tutup dengan deck-glass memakai Canada Balsem.

~         Diperiksa dengan mikroskop memakai lensa rendam minyak.

Preparat ini tahan lama, maka disebut pengecatan abadi.

II.    Cara Hematoxylin HEIDENHAIN.

Larutan Hematoxylin terdiri dari :

Hematoxylin   : 1 gram.

Alkohol 96% : 10 ml.

Aquadest       : 100 ml.

Biarkan 3 hari dalam cawan petri terbuka, saring dan baru dapat dipakai.

Caranya :

~         Buat preparat dari feses, keringkan, kemudian difiksasi 3x di atas nyala api Bunsen.

~         Celupkan ke dalam sub-alkohol Delafeld      : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran, Jod-alkohol                : 10 menit.

~         Cuci dengan air mengalir pelan                     : 10 menit.

~         Celupkan dalam larutan hyposulfit                : 3 menit.

~         Celupkan dalam amm. sulfat 3% (24 H₂O)     : 10 menit.

~         Celupkan dalam Hematoxylin HEIDENHAIN : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran mengalir pelan-pelan    : 15 menit.

~         Celupkan dalam alkohol 96%                       : 1 menit.

~         Celupkan dalam alkohol absolut                   : 1 menit.

~         Celupkan dalam  minyak kayu putih              : 1 menit.

~         Keringkan dengan kertas saring, tutup dengan Canada Balsem, periksa dengan mikroskop.

III.    Cara Hematoxylin SECKY.

~         Buat sediaan dari feces, keringkan dan fiksasi 3x di atas nyala api Bunsen.

~         Rendam dalam alkohol 96%             : 10 menit.

~         Rendam dalam air                           : 10 menit.

~         Rendam dalam Jod-alkohol                         : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran mengalir pelan : 10 menit.

~         Rendam dalam Na-hyposulfit           : 10 menit.

~         Cuci dengan air kran                        : 5 menit.

~         Rendam dalam larutan Hematoxylin HEIDENHAIN sampai warnanya sawo matang.

~         Cuci dengan air kran mengalir pelan : 10 menit.

~         Masukkan dalam alkohol 96%          : 3-5 menit.

~         Masukkan dalam alkohol absolut     : 1 menit.

~         Celupkan dalam xylol                      : 1 menit.

~         Preparat dikeringkan dalam suhu kamar, bubuhi Canada Balsem dan tutup dengan deck-glass, siap untuk dilihat dengan mikroskop.

IV.    PEMERIKSAAN PATOLOGI DENGAN PEWARNAAN HEMATOXYLIN-EOSIN.

Larutan-larutan yang diperlukan :

·         HCl-alkohol 1%    : 1 ml HCl pekat + 99 ml alkohol 70%.

·         Eosin-alkohol 1% : 1 gram eosin kristal + 100 ml alkohol 70%.

·         Carbol-xylol         : 10 gram phenol kristal + 30 ml xylol bersih (murni).

·         Cairan BOHMER HEMATOXYLIN.

2 gram hematoxylin kristal ditambah 20 ml alkohol absolut, disimpan sampai 24 jam. Dalam satu labu Erlenmeyer diisi  dengan 200 ml aquadest yang telah dididihkan, dimasukkan 40 gram Alumunium-ammonium-sulfat. Panaskan sebentar supaya kristalnya mudah larut, sesudah dingin disaring dengan kertas saring. Biarkan 24 jam. Larutan ammonium sulfat ini dicampur dengan larutan hematoxylin Bohmer, simpan kira-kira 6 bulan ditempat terang dan sering-sering di kocok, baru dapat dipergunakan.

Cara pewarnaan :

~         Coupes dimasukkan dalam xylol-lilin            : 5-10 menit

~         Keringkan dan masukkan dalam alkohol 96% : 5-10 menit

~         Cuci dalam aquadest 2-3 kali, dengan aquadest yang berganti-ganti.

~         Pulas dengan Hematoxylin Bohmer : 10-15 menit.

~         Cuci lagi dengan aquadest 2-3 kali berganti-ganti.

~         Cuci dengan HCl-alkohol 1% : ½ menit.

~         Cuci lagi dengan aquadest 2-3 kali berganti-ganti.

~         Masukkan dalam alkohol 70% sebentar.

~         Warnai dengan Eosin-alkohol 1% : 1-2 menit.

~         Cuci dengan alkohol sebentar.

~         Celupkan ke dalam larutan carbol-xylol bersih.

~         Keringkan di udara, tutup dengan deck-glass memakai Canada Balsem.

~         Siap untuk diperiksa dengan mikroskop memakai lensa rendam minyak.