Pewarnaan Flagella

I.    Cara GRAY.

Larutan-larutan yang diperlukan:

·         Kalium aluin 10% dalam air           : 5 ml.

·         Sublimat 20% dalam air                : 2 ml.

·         Asam tanine 20% dalam air           : 2 ml.

·         Basic-fuchsin 3½% dalam             : 0,1 ml.

alkohol kemudian 1 ml alkohol basic fuchsin + 9 ml phenol 5%                                             

Caranya:

1.     Di dalam sebuah tabung reaksi dibuatlah suspensi kuman dari tanaman (lebih baik diambil dari media ”zwerm agar” yaitu media untuk bulu cambuk), 1 ose penuh disuspensikan dengan 1 ml air garam faal steril.

2.     Simpan dalam inkubator 37°C selama 2 jam (lebih).

3.     Satu ose dari suspensi ini diapuskan di atas objek gelas yang bersih, keringkan dan fiksasi di atas api 3x.

4.     Pulas dengan larutan pewarnaan Gray : 10 detik.

5.     Cuci bersih dengan aquadest, kemudian dipulas dengan larutan carbolfuchsin selama 10 detik.

6.     Cuci dengan aquadest, keringkan dengan kertas saring atau pada suhu kamar.

7.     Lihat dengan mikroskop dan hasil pewarnaan:

Flagella (bulu cambuk) berwarna : merah jambu.

II.    Cara LEIFSON (Leifson : J. Bact, 20: 203, 1930).

Larutan pulas Leifson, terdiri dari:

·         Basic fuchsin       : 1 gram.

·         NaCl                    : 1½ gram.

·         Asam tanine         : 2½ gram.

Ketiga zat ini dicampur baik-baik, kemudian 1,7 gram campuran dilarutkan dalam 35 ml alkohol 95% + 65 ml aquadest. Larutan pulas ini disimpan beberapa minggu dalam botol bertutup rapat, baru dipakai.

Caranya :

1.     Sediakan suspensi bakteri dalam air sampai sedikit keruh, yang diambil dari tanaman agar atau sediment dari bouillon.

2.     Satu tetes dari suspensi diteteskan pada objek gelas sedemikian rupa sehinggga tetesan mengalir pada objek.

3.     Keringkan (biarkan) kering pada suhu kamar, kemudian bubuhi larutan pulas, biarkan 10 menit.

4.     Cuci dengan air, bubuhi dengan borax-methylen biru yang encer (1,0 g borax + 0,1 g methylen biru dalam 100 ml aquadest), biarkan 5-10 menit.

5.     Cuci dengan air dan keringkan dengan kertas saring, lihat dengan mikroskop.

6.     Hasil pewarnaan:

Flagella          : merah jambu.

Badan bakteri : agak kebiru-biruan.